اسید پروتئاز

کاربرد و اصل

این اسید پروتئاز برای تعیین فعالیت پروتئولیتیک ، بیان شده به عنوان واحد هموگلوبین بر اساس تیروزین (HUT) ، آماده سازی مشتق شده از Aspergillus oryzae var و Aspergillus niger var ، و ممکن است برای تعیین فعالیت سایر پروتئازها در pH 4.7 استفاده شود. . این آزمایش بر اساس هیدرولیز آنزیمی 30 دقیقه ای یک بستر هموگلوبین در pH 4.7 و 40 درجه است. بستر بدون هیدرولیز با اسید تری کلرواستیک رسوب کرده و با فیلتراسیون برداشته می شود. مقدار هموگلوبین محلول در فیلتراسیون به روش اسپکتروفتومتری تعیین می شود.

معرف ها و محلول های اسید پروتئاز
هموگلوبین از پودر بستر هموگلوبین (Sigma Chemical Co.، Catalog No. H2625) یا ماده مشابه مشابه درجه یک استفاده کنید که کاملاً در آب قابل حل است.
محلول بافر استات 136 گرم استات سدیم (NaC2H3O2 · 3H2O) را در آب کافی حل کرده و 500 میلی لیتر تولید کنید. 25.0 میلی لیتر از این محلول را با 50.0 میلی لیتر اسید استیک 1 میلی متری مخلوط کرده ، با میلی لیتر 1000 میلی لیتر با آب رقیق کرده و مخلوط کنید. PH این محلول باید 02/0 7 7/4 باشد.
محلول بستر 4.0 گرم هموگلوبین را به یک لیوان 250 میلی لیتری انتقال دهید ، 100 میلی لیتر آب به آن اضافه کنید و 10 دقیقه هم بزنید تا حل شود. الکترودهای PH متر را در محلول غوطه ور کنید و در حالی که به طور مداوم هم بزنید ، pH را با افزودن اسید کلریدریک 0.3 N به 1.7 تنظیم کنید. پس از 10 دقیقه ، pH را با افزودن 0/5 میلی متر استات سدیم به 4/7 تنظیم کنید. محلول را به یک فلاسک حجمی 200 میلی لیتری منتقل کرده و با آب رقیق کرده و مخلوط کنید. این محلول در یخچال حدود 5 روز پایدار است.
محلول اسید تری کلرواستیک 140 گرم اسید تری کلرواستیک را در حدود 750 میلی لیتر آب حل کنید. محلول را به یک فلاسک 1000 میلی لیتری منتقل کرده و با حجم آن را رقیق کرده و کاملاً مخلوط کنید.

آماده سازی نمونه مقداری از نمونه را در محلول بافر استات حل کنید تا محلول حاوی هر میلی لیتر بین 9 تا 22 HUT تولید شود. (چنین غلظتی ، در روش زیر ، در محدوده مطلوب 0.2 تا 0.5 ، خواندن جذب ایجاد می کند.)

روش اسید پروتئاز
10.0 میلی لیتر از محلول بستر را در هر سری از لوله های آزمایش 25 Ã - 150 میلی متر پیپ کنید: یکی برای هر آزمایش آنزیم و دیگری برای خالی بستر. لوله ها را در حمام آب در دمای 40 درجه سانتی گراد به مدت حدود 5 دقیقه گرم کنید. به هر لوله ، به جز خالی بستر ، 2.0 میلی لیتر از نمونه آماده سازی اضافه کنید و زمان واکنش را در لحظه اضافه شدن محلول شروع کنید. 2.0 میلی لیتر از محلول بافر استات را به لوله خالی بستر اضافه کنید. لوله ها را با درپوش های لاستیکی شماره 4 ببندید و به آرامی به مدت 30 ثانیه به کف دست ضربه بزنید تا مخلوط شود. هر لوله را دقیقاً به مدت 30 دقیقه در حمام آب در دمای 40 درجه حرارت دهید و سپس 10.0 میلی لیتر از محلول اسید تری کلرواستیک را به سرعت درون هر لوله قرار دهید. هر لوله را به مدت حدود 40 ثانیه با شدت در برابر درپوش تکان دهید ، و سپس اجازه دهید تا 1 ساعت در دمای اتاق خنک شود ، و در این مدت هر لوله را در فواصل 10 تا 12 دقیقه ای لرزانید. جاهای خالی آنزیمی را به صورت زیر آماده کنید: در لوله های جداگانه ، 10.0 میلی لیتر از محلول بستر و حدود 5 میلی لیتر از آماده سازی نمونه را در حمام آب به مدت 30 دقیقه گرم کنید ، سپس 10.0 میلی لیتر از محلول اسید تری کلرواستیک را به محلول بستر اضافه کنید ، خوب تکان دهید به مدت 40 ثانیه و به این مخلوط 2.0 میلی لیتر از نمونه آماده شده از قبل گرم شده اضافه کنید. دوباره تکان دهید و در دمای اتاق به مدت 1 ساعت خنک شوید و در فواصل 10 تا 12 دقیقه تکان دهید.
در پایان 1 ساعت ، هر لوله را به شدت تکان دهید و از طریق کاغذ فیلتر 11 سانتی متری Whatman No. 42 یا معادل آن فیلتر کنید ، نیمه اول فیلتر را از طریق همان کاغذ مجدداً فیلتر کنید. میزان جذب هر فیلترات را در یک سلول 1 سانتی متری ، با سرعت 275 نانومتر ، با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر مناسب ، با استفاده از فیلتراسیون از خالی بستر تعیین کنید تا دستگاه صفر شود. با کم کردن مقدار خالی آنزیم مناسب ، هر قرائت را تصحیح کنید و مقدار بدست آمده را به صورت AU ثبت کنید.
[توجه: اگر میزان جذب صحیح بین 0.2 تا 0.5 بدست نیامد ، آزمایش را با استفاده از کم و بیش از آماده سازی آنزیم در صورت لزوم تکرار کنید.]

منحنی استاندارد 100.0 میلی گرم L- تیروزین ، درجه كروماتوگرافی یا معادل آن (Aldrich Chemical Co.) را كه قبلاً به وزن ثابت خشك شده بود ، به یك فلاسك حجمی 1000 میلی لیتری منتقل كنید. در 60 میلی لیتر اسید کلریدریک 0.1 N حل کنید. هنگامی که L- تیروزن کاملاً حل شد ، محلول را با حجم آب رقیق کرده و کاملاً مخلوط کنید. این محلول حاوی 100 میکروگرم تیروزین در 1.0 میلی لیتر است. سه رقت دیگر از این محلول موجود تهیه کنید تا حاوی 75.0 ، 50.0 و 25.0 میکروگرم تیروزین در میلی لیتر باشد. میزان جذب چهار محلول را در 275 نانومتر در یک سلول 1 سانتی متری در یک اسپکتروفتومتر مناسب در مقابل 0.006 N اسید کلریدریک تعیین کنید. یک قطعه جذب در مقابل غلظت تیروزین تهیه کنید. شیب منحنی را از نظر میزان جذب در هر میکروگرم تیروزین تعیین کنید. این مقدار را در 1.10 ضرب کرده و به صورت AS ضبط کنید. مقداری تقریباً 0.0084 باید بدست آید.

محاسبه پروتئین اسید
یک واحد HUT پروتئولیتیک (اسید پروتئاز) فعالیت به آن مقدار از آنزیم گفته می شود که در 1 دقیقه تحت شرایط تعیین شده ، هیدرولیزاتی تولید می کند که جذب آن در 275 نانومتر همان محلول حاوی 10/1 میکروگرم در میلی لیتر تیروزین در اسید کلریدریک 0.006 N باشد.
HUT در هر گرم از آماده سازی آنزیم اصلی را با معادله محاسبه کنید

HUT / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

که در آن 22 حجم نهایی محلول آزمایش است. 30 زمان واکنش است ، در دقیقه ؛ و W وزن نمونه اصلی گرفته شده در گرم است.

[توجه: مقدار AS در شرایط دقیق کنترل شده و استاندارد 0.0084 است. این مقدار ممکن است به جای مقدار بدست آمده از منحنی استاندارد ، برای کارهای معمول استفاده شود ، اما مقدار دقیق محاسبه شده از منحنی استاندارد باید برای نتایج دقیق تر و در موارد تردید استفاده شود.]

گواهی تجزیه و تحلیل

نام محصول	اسید پروتئاز
نام دیگر	N / A	کشور مبدا	چین
نژاد	Aspergillus oryzae	تاریخ تولید	13 مه 2019
شماره دسته	SP19050903	تاریخ انقضا	12 مه 2021
بسته بندی	25 کیلوگرم / سطل	تعداد	100 کیلوگرم
پروتکل	مشخصات فنی	نتایج	روش
تجزیه و تحلیل فیزیکی و شیمیایی
شرح	پودر قهوه ای	مطابقت دارد	دیداری
بو و طعم	بو و طعم مشخصه	مطابقت دارد	چشیدن
مرطوب	NMT 7٪	5.1٪	آنالایزر رطوبت
شناسایی
فعالیت قابل شناسایی	مثبت برای فعالیت بروملین	مطابقت دارد	در خانه
فعالیت
فعالیت پروتئاز	50000 NLT HUT / گرم	508،270 HUT / گرم	FCC VII
میکروبیولوژیک
تعداد کل باکتریها باکتری های کلی فرم (CFU / گرم) کپک و مخمر ای کولی سالمونلا استافیلوکوکوس اورئوس سودوموناس آئروژینوزا	NMT 3000 CFU / گرم NMT 30 CFU / گرم NMT 100 CFU / گرم غایب غایب غایب غایب	500 CFU / گرم C10 CFU / گرم C10 CFU / گرم تشخیص داده نشد تشخیص داده نشد تشخیص داده نشد تشخیص داده نشد	FDA BAM آنلاین Ch.3 FDA BAM آنلاین Ch.4 FDA BAM آنلاین Ch. 2 FDA BAM آنلاین Ch.4 FDA BAM آنلاین Ch.5 FDA BAM آنلاین Ch.12 AOAC
فلزات سنگین
رهبری سیاره تیر کادمیوم آرسنیک	NMT 3 ppm NMT 0.1 ppm NMT 1 ppm NMT 1 ppm	0.21 ppm 0/1 ppm ppm 1 pp1ppm	USP <231> USP <231> USP <231> USP <231>
ذخیره سازی: در جای خشک و خنک و در امان از نور نگهداری شود ، در صورت عدم استفاده از طبل ، آن را نزدیک نگه دارید. نتیجه گیری: مطابق با استانداردهای IU است. ماندگاری: ماندگاری اسید پروتئاز در شرایط ذخیره سازی تجویز شده و بسته بندی در هوا 2 سال خواهد بود. این محصول با مشخصات فوق مطابقت دارد تأیید شده توسط RICKY H. ZHU امضا کننده مجاز

*The above information is a direct translation of the information provided to Newgen Biotech from the manufacturer of اسید پروتئاز. This Certificate of Analysis should be used for informational purposes and is not intended as a substitute for strict quality control analysis by the purchaser of this product.

بسته بندی و ذخیره سازی

کیسه بسته بندی مواد غذایی جامد ، 25 کیلوگرم در بشکه.

اسید پروتئاز باید در مکانهای خشک ، خنک و دارای تهویه مناسب و دور از آفتاب ، گرما نگهداری شود.

پرداخت :T / T ، Paypal ، Western Union ، Alibaba Trade Assurance ، VISA ، MasterCard ، بررسی الکترونیکی ، پرداخت بعدا ، LC و غیره