گلوکان بتا

کاربرد و اصل

کاربرد و اصل This procedure is used to determine Beta glucan activity of enzyme preparations derived from Aspergillus niger var. and Bacillus subtilis var. The assay is based on a 15-min hydrolysis of lichenin substrate at 40°and at pH 6.5. The increase in reducing power due to liberated reducing groups is measured by the neocuproine method.

معرف ها و محلول ها
بافر فسفات 13.6 گرم فسفات پتاسیم مونوبازیک را در حدود 1900 میلی لیتر آب حل کنید ، 70٪ محلول هیدروکسید سدیم به آن اضافه کنید تا pH 5/6 ± 5/6 باشد ، سپس محلول را به یک فلاسک حجمی 2000 میلی لیتری منتقل کرده و با آب رقیق کرده و مخلوط کنید. .
محلول نئوكوپروین A 40.0 گرم كربنات سدیم بی آب ، 16.0 گرم گلیسین و 450 میلی گرم سولفات كپنریک پنتاهیدرات را در حدود 600 میلی لیتر آب حل کنید. محلول را به یک فلاسک 1000 میلی لیتری منتقل کرده و با آب رقیق کرده و مخلوط کنید.
محلول نئوكوپروین B 600 میلی گرم هیدروكلرید نئوكوپروین را در حدود 400 میلی لیتر آب حل كرده ، محلول را به یك فلاسك حجمی 500 میلی لیتری منتقل كرده و با آب رقیق كرده و مخلوط می كنیم. هنگام ایجاد رنگ زرد ، آن را دور بریزید.
Substrate Lichenin 150 میلی گرم لیکنین (Sigma Chemical Co.، Catalog No. L-6133 یا معادل آن) را به یک پودر ریز درون ملات خرد کرده و در حدود 50 میلی لیتر آب در حدود 85 درجه حل کنید. پس از اتمام محلول (20 تا 30 دقیقه) ، 90 میلی گرم بوروهیدرید سدیم اضافه کرده و به مدت 1 ساعت در زیر نقطه جوش حرارت دهید. 15 گرم Amberlite MB-3 یا یک رزین تبادل یونی معادل آن اضافه کنید و به مدت 30 دقیقه به طور مداوم هم بزنید. با کمک خلا vac از طریق کاغذ فیلتر Whatman شماره 1 یا معادل آن در یک قیف بوشنر فیلتر کنید و کاغذ را با حدود 20 میلی لیتر آب بشویید. 680 میلی گرم فسفات پتاسیم مونوبازیک به فیلتر اضافه کنید و از طریق یک پد فیلتر Millipore 0.22 میکرومتر یا معادل آن فیلتر کنید. پد را با 10 میلی لیتر آب بشویید و pH فیلتراسیون را با هیدروکسید سدیم 1 N یا اسید کلریدریک 1 N به 5/6 6. 5/5 تنظیم کنید. فیلتر را به یک فلاسک 100 میلی لیتری منتقل کرده و با آب رقیق کرده و مخلوط کنید. بیش از 3 روز در دمای 2 تا 4 درجه نگهداری شود.
محلول استاندارد گلوکز 36.0 میلی گرم دکستروز بی آب را در بافر فسفات در یک فلاسک حجمی 1000 میلی لیتری حل کرده و با آب رقیق کرده و مخلوط کنید.
آماده سازی آزمایش یک محلول از نمونه آماده سازی آنزیم تهیه کنید تا 1 میلی لیتر از رقت نهایی بین 01/0 تا 02/0 واحد بتا گلوکان باشد. نمونه را وزن کرده ، آن را در یک فلاسک حجمی با اندازه مناسب منتقل کرده و با بوفر فسفات به حجم رقیق کرده و مخلوط می کنیم.

روش
در هر چهار لوله آزمایش جداگانه 2 میلی لیتر سوبسترا از لیچین را پیپت کنید و در 25 میلی لیتر فارغ التحصیل شوید و لوله ها را در حمام آب در دمای 40 درجه به مدت 10 تا 15 دقیقه گرم کنید تا تعادل یابد.
پس از تعادل ، 1 میلی لیتر بافر فسفات به لوله 1 (بستر خالی) ، 1 میلی لیتر محلول استاندارد گلوکز به لوله 2 (استاندارد گلوکز) ، 4 میلی لیتر محلول نئوکوپروین A و 1 میلی لیتر آماده سازی تست به لوله 3 (خالی آنزیم) اضافه کنید ) ، و 1 میلی لیتر از تست آماده سازی برای لوله 4 (نمونه). لوله پنجم را برای خالی بافر آماده کنید و 3 میلی لیتر بافر فسفات اضافه کنید.
پنج لوله را دقیقاً به مدت 15 دقیقه در دمای 40 درجه انکوبه کنید و سپس 4 میلی لیتر محلول A نئوکوپروین را به لوله های 1 ، 2 ، 4 و 5 اضافه کنید. اندازه سنگ مرمر شیشه ای.
[احتیاط: از درپوش لاستیکی استفاده نکنید. ]
لوله ها را دقیقاً به مدت 12 دقیقه در یک حمام آب کاملاً در حال جوش گرم کنید تا رنگ آن گرفته شود ، سپس در دمای اتاق در آب سرد خنک شود و حجم هر یک را با 25 میلی لیتر با آب تنظیم کنید. لوله ها را با پارافیلم یا بستن مناسب دیگر ببندید و با وارونه کردن چندین بار مخلوط کنید.
میزان جذب هر محلول را در 450 نانومتر در سلول های 1 سانتی متری ، با یک اسپکتروفتومتر مناسب ، در برابر خالی بافر در لوله 5 تعیین کنید.

محاسبه
یک واحد بتا گلوکان (BGU) به عنوان آنزیمی تعریف می شود که تحت شرایط آزمایش ، قند کاهش دهنده (به عنوان هم ارزی گلوکز) را با سرعت 1 میکرومول در دقیقه آزاد می کند.
فعالیت آماده سازی آنزیم گرفته شده برای تجزیه و تحلیل را به شرح زیر محاسبه کنید:
BGU = [(A4 A3) × 36 × 106] / [(A2 A1) × 180 — 15 ×  میکرومتر نمونه]

که در آن A4 جذب نمونه است (لوله 4) ، A3 جذب آنزیم خالی است (لوله 3) ، A2 جذب استاندارد گلوکز است (لوله 2) ، A1 جذب خالی بستر است (لوله 1) ، 36 میکروگرم گلوکز در محلول استاندارد گلوکز ، 106 عامل تبدیل میکروگرم به گرم ، 180 وزن 1 میکرومتر گلوکز و 15 زمان واکنش در دقیقه است.

گواهی تجزیه و تحلیل

* اطلاعات فوق ترجمه مستقیم اطلاعاتی است که از سازنده این محصول به Newgen Biotech ارائه شده است. این گواهینامه تجزیه و تحلیل باید برای اهداف اطلاعاتی استفاده شود و به عنوان جایگزینی برای تجزیه و تحلیل دقیق کنترل کیفیت توسط خریدار این محصول در نظر گرفته نشده است.

بسته بندی و ذخیره سازی

کیسه بسته بندی مواد غذایی جامد ، 25 کیلوگرم در بشکه.

در مکانهای خشک ، خنک و دارای تهویه مناسب و دور از آفتاب ، گرما نگهداری شود.

پرداخت :T / T ، Paypal ، Western Union ، Alibaba Trade Assurance ، VISA ، MasterCard ، بررسی الکترونیکی ، پرداخت بعدا ، LC و غیره